Spanische Truppen unter Pedro Menéndez de Avilés erobern die französische Hugenotten-Siedlung Fort Caroline in der Nähe des heutigen Jacksonville, Florida. Die Franzosen, die von Rene Goulaine de Laudonniere kommandiert wurden, verloren 135 Mann in der ersten Instanz der Kolonialkriegsführung zwischen europäischen Mächten in Amerika. Die meisten der Getöteten wurden auf Befehl von Aviles ermordet, der angeblich die Erschlagenen neben der Aufschrift „Nicht als Franzosen, sondern als Ketzer“ an Bäumen aufhängen ließ. Laudonniere und etwa 40 weitere Hugenotten flohen.
1564 hatten sich die französischen Hugenotten (Protestanten) an den Ufern des Monats Mai niedergelassen, einem strategischen Punkt an der Küste Floridas. König Philipp II. Von Spanien wurde durch diese Herausforderung an die spanische Autorität in der Neuen Welt gestört und schickte Pedro Menéndez de Avilés nach Florida, um die französischen Ketzer zu vertreiben und dort eine spanische Kolonie zu errichten. Anfang September 1565 gründete Aviles San Augustin an der Küste Floridas, aus dem später Saint Augustine als älteste Stadt Nordamerikas hervorging. Zwei Wochen später, am 20. September, griff er die französische Siedlung Fort Caroline an und zerstörte sie.
Die entscheidende Niederlage Frankreichs ermutigte Frankreich, seine Kolonialbemühungen in Amerika weit im Norden, im heutigen Quebec und Nova Scotia in Kanada, neu auszurichten.
